荧光分光光度计的基本原理

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定， 不但可以做般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化， 从而阐明分子结构与能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品(如凝胶条、粉末)的光谱扫描。

构成

1. 光源：

为压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

2．激发单色器：

置于光源和样品室之间的为激发单色器或*单色器，筛选出定的激发光谱。

3．发射单色器：

置于样品室和检测器之间的为发射单色器或二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出定的发射光谱。

4． 样品室：

通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

5． 检测器：

般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。

基本原理

由压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能的分布具有各自不同的征，这种征反映在荧光上表现为各种物质都有其征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地行物质的鉴定。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法行。