胶体金检测的检测原理和常用检测

胶体金是种常用的标记，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的种新型的免疫标记，有其的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹几乎都使用其标记。同时在式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。

检测原理

胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成定大小的金颗粒，并由于静电作用成为种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物性。

胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的些物理性状，如电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种形的粒子对蛋白质有很强的吸附能，可以与葡萄菌A蛋白、免疫蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的具。

免疫金标记(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有电子密度的性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。

常用检测

免疫胶体金光镜染色法

细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。

免疫胶体金电镜染色法

可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织薄切片结合，然后行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。

斑点免疫金渗滤法

应用微孔滤膜(如膜)作载体，将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。

胶体金免疫层析法

将异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。

快速金标试剂

是将异的抗体固定于酸类纤维素膜的某区带，当该干燥的酸类纤维素端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生异性结合。同时利用金粒具有电子密度的性，在金标蛋白结合处。当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色的斑点。既为快速的金标检测方法原理。快速而试剂，要点在于所采用的单克隆抗体、多元克隆抗体、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及胶体金等原料的灵敏性及异性等是否能达到较的标准，此为金标试剂的质量之重要的标准。